作為一款廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、組織工程及臨床診斷的倒置顯微鏡，尼康TS2系列憑借其緊湊型設(shè)計、高對比度成像技術(shù)及智能化操作界面，成為實驗室研究的理想工具。本文將從基礎(chǔ)操作、成像模式切換、熒光觀測技術(shù)及日常維護四個維度，系統(tǒng)解析TS2顯微鏡的核心使用方法。
一、基礎(chǔ)操作流程：標(biāo)準(zhǔn)化與人體工程學(xué)設(shè)計
TS2顯微鏡采用模塊化設(shè)計，其操作流程嚴(yán)格遵循人體工程學(xué)原則：
1.開機準(zhǔn)備
連接電源后，啟動主電源開關(guān)（位于鏡體下端），確認(rèn)系統(tǒng)供電正常。
調(diào)節(jié)載物臺高度至最低位置，避免物鏡觸碰樣本。
將樣本置于載物臺中央，使用專用載玻片托板（如CS-HS載玻片托板）固定，確保樣本通光孔對齊。
2.光路校準(zhǔn)
明場模式：旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器選擇低倍物鏡（如4×），將光路切換器調(diào)至目鏡觀察位置。
光源調(diào)節(jié)：開啟透射光閘門控制桿，通過亮度調(diào)節(jié)模塊將初始光強設(shè)為60%，避免樣本過曝。
柯勒照明校準(zhǔn)：調(diào)節(jié)聚光鏡高度至最高位置，取下目鏡直接觀察鏡筒內(nèi)孔徑光闌，使其直徑約為物鏡數(shù)值孔徑（NA）的80%。例如，使用10×物鏡（NA=0.3）時，光闌直徑應(yīng)調(diào)整至0.24mm。
3.聚焦與觀察
旋轉(zhuǎn)粗調(diào)旋鈕使載物臺緩慢上升，直至樣本接近物鏡（約1mm距離）。
從目鏡觀察，反向旋轉(zhuǎn)粗調(diào)旋鈕使載物臺下降，待樣本進入視野后，切換至微調(diào)旋鈕進行精細(xì)聚焦。
通過載物臺位移控制器（X-Y軸向精密位移）移動樣本，尋找目標(biāo)觀測區(qū)域。
二、成像模式切換：相差與浮雕反差技術(shù)
TS2顯微鏡支持多種對比度增強技術(shù)，適用于不同樣本類型：
1.相差成像（Phase Contrast）
匹配相差環(huán)位置：4×物鏡對應(yīng)PHL環(huán)，10×/20×/40×物鏡對應(yīng)PH1環(huán)。
插入專用相位板，調(diào)節(jié)聚光鏡孔徑光闌至與物鏡NA匹配（如40×物鏡需關(guān)閉光闌至0.55mm）。
示例：觀察活細(xì)胞動態(tài)時，相差模式可消除染色步驟，直接呈現(xiàn)細(xì)胞骨架及細(xì)胞器輪廓。
2.浮雕反差成像（Emboss Contrast）
激活聚光鏡與目鏡筒的浮雕滑塊，通過右側(cè)旋鈕調(diào)節(jié)反差強度（0-10級）。
兼容玻璃與塑料培養(yǎng)皿，尤其適用于厚樣本（如iPS細(xì)胞球體）。
優(yōu)勢：相比傳統(tǒng)相差技術(shù)，浮雕反差可減少光暈干擾，提供近似三維的無眩光圖像。
三、熒光觀測技術(shù)：多波段激發(fā)與噪聲控制
TS2-FL型號配備落射熒光模塊，支持DAPI、FITC、TRITC等多色熒光標(biāo)記觀測：
1.操作前準(zhǔn)備
關(guān)閉所有透射光源，切換至EPI落射照明模式。
根據(jù)熒光染料特性選擇濾色塊組：
DAPI系列：激發(fā)波長365nm（紫外光）
FITC系列：激發(fā)波長480nm（藍光）
TRITC系列：激發(fā)波長540nm（綠光）
2.成像優(yōu)化
在暗室環(huán)境下操作，初始光強設(shè)為最大值，通過亮度調(diào)節(jié)模塊逐步降低至適宜水平。
使用NIS-Elements軟件進行白平衡校準(zhǔn)及曝光參數(shù)優(yōu)化，避免熒光信號飽和。
示例：觀察GFP標(biāo)記的細(xì)胞時，選擇480nm激發(fā)濾光片，曝光時間控制在100-300ms。
四、日常維護與故障排除
1.清潔規(guī)范
每周使用專用鏡頭紙清潔光學(xué)表面（物鏡、目鏡、聚光鏡），避免劃傷。
每月檢查機械部件潤滑狀態(tài)，對載物臺導(dǎo)軌涂抹適量硅基潤滑脂。
2.關(guān)機流程
將所有光源強度歸零，關(guān)閉主機電源后斷開總電源。
旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器至空檔位，防止灰塵沉降。
示例：長期閑置時，建議使用防塵罩覆蓋顯微鏡主體，并存放于干燥環(huán)境（濕度<60%）。
3.常見故障處理
圖像模糊：檢查物鏡是否準(zhǔn)確處于光路中，重新校準(zhǔn)柯勒照明。
光強不均：清潔聚光鏡及濾色塊表面，調(diào)整孔徑光闌至匹配物鏡NA。
載物臺卡滯：拆卸機械平臺，清潔導(dǎo)軌并重新涂抹潤滑脂。
總結(jié)
TS2顯微鏡通過集成化設(shè)計與智能化功能，顯著提升了細(xì)胞成像的效率與精度。從基礎(chǔ)操作到熒光觀測，研究者需嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化流程，并結(jié)合樣本特性選擇合適的成像模式。定期維護與故障預(yù)防可延長設(shè)備壽命，確保長期穩(wěn)定的觀測性能。
